Sentol nuklein turşularının təmizlənməsi və təcrid edilməsi üçün reagentlər. Heyvan yemi və ya bitki materialları

Sürətli mikrosütunlu DNT ekstraksiya üsulu qan, plazma, tüpürcək, sidik, hüceyrə kulturalarından və tampondakı istənilən hüceyrə qranullarından ümumi DNT-nin çıxarılması üçün nəzərdə tutulmuşdur. İzolyasiya edilmiş DNT-nin yüksək təmizliyi onu bütün analiz növləri üçün istifadə etməyə imkan verir.

təcrid müddəti nümunələrin sayından asılı olaraq 30 ilə 45 dəqiqə arasında dəyişir;

• DNT-nin sütun membranına effektiv bağlanması nümunədən ən yüksək DNT məhsulunu əldə etməyə imkan verir;
• lizinq və yuyucu məhlulların komponentlərinin optimallaşdırılmış tərkibi sayəsində yüksək dərəcədə təmizlənmə əldə edilir;
• digər sorbent ekstraksiya üsulları ilə müqayisədə yuyulma zamanı parçalanma və DNT itkisi əhəmiyyətli dərəcədə azaldı;
• elüsyon məhlulunun həcmini azaltmaqla DNT-ni konsentrasiya etmək mümkündür;
• Sütunlarda DNT çıxarılması əlavə plastik istehlakını əhəmiyyətli dərəcədə azaldır;
• maksimum nümunə həcmi - 200 µl;
• dəstdə Proteinaz K var;
• təcrid olunmuş DNT-nin saflığı A260/A280 nisbətinə görə 1,8-1,9;
• Çıxarılan DNT-nin miqdarı nümunənin növündən və miqdarından asılıdır. 200 µl qandan DNT məhsulu orta hesabla 5-6 µg təşkil edir.

Genomik DNT-nin təcrid edilməsi üçün reagentlər dəsti "DNT-Extran"

DNT-Extran seriyasının genomik DNT-sini təcrid etmək üçün dəstlərdən istifadə edərək, DNT-ni müxtəlif bioloji materiallardan təcrid edə bilərsiniz: qan, bakteriya və heyvan hüceyrələrinin mədəniyyətləri, heyvan və bitkilərin təzə, dondurulmuş və ya qurudulmuş toxumaları.

• hüceyrələrdən tam DNT çıxarılması, təmizlənmə zamanı DNT itkisini və parçalanmasını minimuma endirmək;
• təcrid olunmuş DNT var yüksək səviyyə təmizlik (nisbət A260/A280 = 1,8-1,9) və PCR, məhdudlaşdırıcı həzm, hibridləşmə və digər tədqiqatlar üçün uyğundur;
• dəstlərdə fenol və xloroform kimi potensial təhlükəli komponentlər yoxdur, böyük miqdarda plastik tələb olunmur və zəhərli tullantılar əmələ gətirmir.

"M-Sorb-Tube" maqnit hissəcikləri üzərində DNT ekstraktı üçün reagentlər dəsti

Mikobakteriyaların DNT-sinin bəlğəmdən, bronxların yuyulmasından, serebrospinal mayedən, ekssudatdan, punktatdan, biopsiyadan, sidikdən, cinsiyyət orqanlarından ifrazatdan və hüceyrə kulturalarından təcrid edilməsi üçün uyğunlaşdırılmışdır. Klinik materialın əvvəlcədən emalı mikrobioloji tədqiqatlar üçün nümunə hazırlamaq üçün standart prosedurlara uyğun olaraq həyata keçirilir (Rusiya Federasiyası Səhiyyə Nazirliyinin 21 mart 2003-cü il tarixli 109 nömrəli əmri "Rusiya Federasiyasında vərəm əleyhinə tədbirlərin təkmilləşdirilməsi haqqında" ”, Əlavə 11 “Unifikasiya edilmiş metodlar üçün təlimat mikrobioloji tədqiqat vərəmin aşkarlanması, diaqnostikası və müalicəsində”). Kliniki materialı təsirsiz hala gətirmək üçün inkişaf etdirdiyimiz təsirsizləşdirici A məhlulundan istifadə etməyi tövsiyə edirik.

Həll A 12 saat ərzində mikobakteriyaları öldürür və klinik materialı dezinfeksiya edir, bundan sonrakı analizlər üçün istifadə edilə bilər (DNT çıxarılması, PCR və s.). A məhlulu xüsusi olaraq bəlğəmin müalicəsi üçün uyğunlaşdırılmışdır və NaOH-NALC məhlulundan istifadə etməklə standart proseduru tamamilə əvəz edir və müstəsna mukolizəedici xüsusiyyətlərə malikdir. İnaktivasiya Həlli A standart NaOH-NALC nümunəsinin hazırlanması ilə müqayisədə DNT məhsuldarlığını artırır.

İzolyasiya texnikasına aşağıdakılar daxildir: guanidin izotiosiyanat ilə DNT lizisi, maqnit hissəcikləri üzərində DNT sorbsiyası, sentrifuqasiya ilə DNT-nin çökməsi, yuyulma mərhələləri və DNT-nin elüsyonu. DNT-ni digər mikroorqanizmlərdən təcrid etmək üçün istifadə edilə bilər.

sorbent kimi silisium gellə örtülmüş maqnit hissəciklərinin istifadəsi digər sorbentlərlə müqayisədə texnoloji cəhətdən daha təkmil və rahat formatdır və DNT ekstraksiya texnikasının maksimum standartlaşdırılmasına və avtomatlaşdırılmasına imkan verir;

Hər bir test nümunəsinə daxili müsbət nəzarət (IPC) əlavə edilir, RT-PCR inhibitorlarının mövcudluğu/yoxluğu və DNT ekstraksiyasının effektivliyi IPC gücləndirmə reaksiyası ilə müəyyən edilir.

Qida məhsullarından və qida xammalından DNT çıxarılması üçün reagent dəstləri

“Sorb-GMO-A” və “Sorb-GMO-B” reagent dəstləri xüsusi olaraq bitki materiallarından DNT çıxarılması üçün nəzərdə tutulub. qida məhsulları və qidalandırmaq. Hər iki dəst DNT-nin təmizlənməsi üçün silikon sorbentdən istifadə edir. “Sorb-GMO-A” lizinq agenti kimi guanidin xlorid ehtiva edir, “Sorb-GMO-B” bitki komponentlərindən maksimum DNT məhsuldarlığını təmin edən ionlu CTAB yuyucu vasitəsidir. Fərqli Xüsusiyyətlər Sorb-GMO-A dəstinin üstünlükləri DNT ekstraksiyasının sürəti və xloroformun olmamasıdır ki, bu da dəstlə işləməyi daha təhlükəsiz edir.

Su nümunələrindən DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti (maqnit hissəcikləri üzrə) "M-Sorb-Leg"

Legionella DNT-nin təcrid edilməsi üçün nəzərdə tutulmuşdur su obyektləri mühit(soyutma qüllələri, hovuzlar, su parkları, isti və soyuq su təchizatı sistemləri). Legionellanın minimum təcrid olunmuş konsentrasiyası 0,5 litr nümunə üçün 100 hüceyrədir.

“M-Sorb-Leg” dəsti iki modifikasiyada istehsal olunur: həcmi 1-1000 ml olan su nümunələri üçün “M-Sorb-Leg1000” və həcminə qədər olan su nümunələri üçün “M-Sorb-Leg1” 1 ml. M-Sorb-Leg1000 dəsti polikarbonat filtrdən istifadə edərək suyun filtrasiyasını təmin edir.

M-Sorb-Leg reagent dəsti çox çirklənmiş su nümunələrində mövcud olan PCR inhibitorlarından xilas olmağa imkan verir;

• DNT təcrid texnikası DNT-nin silisium gellə örtülmüş maqnit hissəcikləri üzərində sorbsiyasına və sonra çökdürmə reagenti ilə çökdürülməsinə əsaslanır. Sorbsiya üsullarının və ümumi çöküntü metodunun üstünlüklərini özündə birləşdirir;
• Hər bir test nümunəsinə daxili müsbət nəzarət (IPC) əlavə edilir, RT-PCR inhibitorlarının mövcudluğu/yoxluğu IPC gücləndirmə reaksiyası ilə müəyyən edilir.

Ətraf mühit obyektlərindən DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti (maqnit hissəcikləri üzrə) "M-Sorb-OOM"

M-Sorb-OOM reagent dəsti xüsusi təhlükəli mikroorqanizmlərlə (DOM) yoluxma şübhəsi olan ətraf mühit obyektlərindən (torpaq, su, heyvan cəsədləri və s.) DNT-nin təcrid edilməsi, onları sonrakı analizlərə hazırlamaq üçün nəzərdə tutulub. RT-PCR. İzolyasiya proseduru M-Sorb-Leg dəsti üçün təsvir edilənə bənzəyir.

RNT izolyasiyası üçün reagentlər dəsti "RNA-Extran"

Dəst RNT-ni qandan, toxuma fraqmentlərindən və hüceyrə kulturalarından təcrid etmək üçün nəzərdə tutulub. RNT-Extran dəsti ilə əldə edilən RNT həm RT-PCR, həm də hibridləşmə analizi, in vitro tərcümə və klonlama üçün istifadə edilə bilər.

RNT izolyasiyasının prinsipi Xomçinskiyə görə turşulu fenolik ekstraksiyaya əsaslanır ki, burada sulu fazada yalnız RNT qalır, zülallarla kompleksdə olan DNT isə üzvi fazaya keçir. Quanidin tiosiyanat hüceyrə nukleazları üçün təcrid və denaturasiya agenti kimi istifadə olunur.

DNT çirklərindən təmizlənmiş yüksək təmizlənmiş RNT əldə etməyə imkan verir;

tam qandan, toxuma fraqmentlərindən və hüceyrə mədəniyyətlərindən RNT-nin tam çıxarılmasını təmin edir;

zədələnməmiş RNT əldə etməyə imkan verir;

• RNT təcrid müddəti - 1 saat.

kataloq nömrəsi	ad	reaksiyaların sayı
EX-509	Tam qandan genomik DNT-nin təcrid edilməsi üçün “DNA-Extran-1” reagentlər dəsti	100
EX-511	Heyvan və insan toxumalarından DNT çıxarılması üçün “DNT-Extran-2” reagentlər dəsti	100
EX-512	Bakterial kulturalardan DNT çıxarılması üçün “DNA-Extran-3” reagentlər dəsti	100
EX-513	Bitki toxumalarından DNT çıxarılması üçün “DNT-Extran-4” reagentlər dəsti	100
EX-514	Sütunlarda ümumi DNT-nin (qan, tüpürcək, sidik, hüceyrə kulturalarından, epitel hüceyrələrinin qırıntılarından) təcrid edilməsi üçün “K-Sorb” reagentlər dəsti.	100
EX-515	RNT-ni qandan, toxumalardan, hüceyrə kulturalarından təcrid etmək üçün "RNT-Extran" reagentlər dəsti	50
OM-505	Klinik nümunələrdən və hüceyrə kulturalarından DNT çıxarılması üçün "M-Sorb-Tub" reagentlər dəsti (maqnit hissəcikləri üzərində)	50 və ya 100
GM-502-50	“SORB-GMO-A” (guanidin + sorbent) Bitki materiallarından və qida məhsullarından DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti	50
GM-503-50	“SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Bitki materiallarından və qida məhsullarından DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti	50
OM-506	1000 ml-ə qədər su nümunələrindən Legionella DNT-sini təcrid etmək üçün “M-Sorb-Leg1000” reagentlər dəsti (maqnit hissəcikləri üzrə, filtrlər ayrıca verilir)	50 və ya 100
OM-507	Həcmi 1 ml-ə qədər olan su nümunələrindən Legionella DNT-nin təcrid edilməsi üçün “M-Sorb-Leg1” reagentlər dəsti (maqnit hissəcikləri üzrə)	50 və ya 100
OOM-502	Ətraf mühit obyektlərindən DNT çıxarılması üçün “M-sorb-OOM” reagentlər dəsti (maqnit hissəcikləri üzərində)	50 və ya 100

Sifariş məlumatı

ad	Həcmi	İstehsal	Metod	Cat.No.
“GMO-MagnoSorb” (guanidin + maqnit sorbent) Bitki materiallarından və qida məhsullarından DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti	50 ayırma	Sintol	Real vaxtda PCR	GM-505-50
“SORB-GMO-A” (guanidin + sorbent) Bitki materiallarından və qida məhsullarından DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti	50	Sintol	Real vaxtda PCR	GM-502-50-50
“SORB-GMO-B” (CTAB+sorbent) Bitki materiallarından və qida məhsullarından DNT çıxarılması üçün reagentlər dəsti	50	Sintol	Real vaxtda PCR	GM-503-50-50
Klinik nümunələrdən və mədəniyyət hüceyrələrindən (maqnit hissəciklərində) mikobakteriyaların DNT-sinin təcrid edilməsi üçün “Amplitub-RV” dəsti №1 (“M-Sorb-Tub”) reagentlər dəsti	50	Sintol	Real vaxtda PCR	OM-505
Tam qandan genomik DNT-nin təcrid edilməsi üçün “DNA-Extran-1” reagentlər dəsti	100	Sintol	Real vaxtda PCR	EX-509-100
Heyvan və insan toxumalarından DNT çıxarılması üçün “DNT-Extran-2” reagentlər dəsti	100	Sintol	Real vaxtda PCR	EX-511
Bakterial kulturalardan DNT çıxarılması üçün “DNA-Extran-3” reagentlər dəsti	100	Sintol	Real vaxtda PCR	EX-512-100
Bitki toxumalarından DNT çıxarılması üçün “DNT-Extran-3” reagentlər dəsti	100	Sintol	Real vaxtda PCR	EX-513-100
Sütunlarda ümumi DNT-nin (qan, tüpürcək, sidik, hüceyrə kulturalarından, epitel hüceyrələrinin qırıntılarından) təcrid edilməsi üçün “K-Sorb” reagentlər dəsti.	100	Sintol	Real vaxtda PCR	EX-514-100
	48 reaksiya	Sintol	Real vaxtda PCR	GM-443-48
“Soya / 35S+FMV / NOS skrininq” reagentlər dəsti	50 reaksiya	Sintol	Real vaxtda PCR	GM-416-50

"DNA-sorb-S-M" ® AmpliSens FBUN Rospotrebnadzorun Mərkəzi Tədqiqat Epidemiologiya İnstitutu, Yalnız tədqiqat üçün Rusiya Federasiyası, 111123 və digər qeyri-tibbi məqsədlər üçün, Moskva, ... "

TƏLİMATLAR

reagent dəstinin istifadəsi haqqında

bioloji materialdan DNT çıxarılması üçün

"DNT-sorb-S-M"

AmpliSense

FBUN Mərkəzi Tədqiqat Epidemiologiya İnstitutu

Rospotrebnadzor,

Yalnız tədqiqat məqsədləri üçün

Rusiya Federasiyası, 111123,

və digər qeyri-tibbi məqsədlər üçün

Moskva şəhəri, Novogireevskaya küçəsi, bina 3A

QISARIŞLARIN SİYAHISI

MƏQSƏD

ÜSULUN PRİNSİPİ

TAMAMLAMA FORMALARI

HEYVANLARDAN BİOLOJİ MATERİDDƏN DNT EKSTRASİYASI................ 8

HEYVAN YEMİ VƏ YA BİTKİ XAMMALLARI

ÇAP MƏHSULLARINDA İSTİFADƏ EDİLƏN İŞARƏLƏR

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 2/15

QISARIŞLARIN SİYAHISI

IN bu təlimatdan Aşağıdakı qısaltmalar və təyinatlar istifadə olunur:

DNT – dezoksiribonuklein turşusu NA – nuklein turşuları OK – mənfi ekstraksiya nəzarəti NCO – mənfi nəzarət nümunəsi PC – müsbət ekstraksiya nəzarəti PKO – müsbət nəzarət nümunəsi PCR – polimeraza zəncirvari reaksiya

- Federal büdcə təşkilatı elm

FBUN Mərkəzi Tədqiqat İnstitutu

İstehlakçıların Hüquqlarının və İnsan Rifahının Müdafiəsi Rospotrebnadzor Sahəsində Nəzarət Federal Xidmətinin "Mərkəzi Tədqiqat Epidemiologiya Epidemiologiya İnstitutu"

MƏQSƏD

DNT-sorb-S-M reagent dəsti heyvanlardan bioloji materialdan DNT çıxarılması üçün nəzərdə tutulub: toxuma (biopsiya (sidik-cinsiyyət sisteminin dəri və selikli qişaları, mədə-bağırsaq traktının, bronxlar), cərrahi və yarılma) material; və polimeraza zəncirvari reaksiyadan (PZR) istifadə edərək sonrakı tədqiqatlar üçün qida, bioloji əlavələr, heyvan yemi və ya bitki materiallarından DNT çıxarılması.

DNT çıxarılması PCR metodunun preanalitik prosedurudur.

Ekstraksiya üçün sınaq nümunəsinin həcmi: 100 µl (həcmi 10-100 µl və ya çəkisi 10-100 mq olan nümunələrə icazə verilir)1.

DİQQƏT! Toplama proseduru, sınaq materialının daşınması və saxlanması şərtləri, onun DNT ekstraksiyasına hazırlanması ehtiyacı və proseduru, həmçinin müdaxilə edən maddələr və nümunə ilə bağlı məhdudiyyətlər haqqında məlumat üçün gücləndirici reagent dəsti üçün təlimatlara baxın. istifadə olunur.

ÜSULUN PRİNSİPİ

Test nümunəsi2 tərkibində proteinaz K olan lizis məhlulu ilə müalicə olunur, nəticədə hüceyrə membranları məhv edilir və NK və hüceyrə komponentləri buraxılır. Həll edilmiş NC-lər sorbent hissəcikləri ilə birləşir, lizis test materialının digər komponentləri isə məhlulda qalır və sorbent çöküntüsü zamanı çıxarılır.

Bəzi bioloji material növləri nümunə hazırlama mərhələsini tələb edir. Cm.

gücləndirmək üçün istifadə olunan reagent dəsti üçün təlimatlar.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / 15 səhifənin 3-ü sentrifuqa və sorbentin sonradan yuyulması ilə. Sorbentə elüsyon tamponu əlavə edildikdə, NC silisium səthindən məhlula keçir və sorbent hissəciklərindən sentrifuqa ilə ayrılır. Bu prosedurun nəticəsi olaraq PZR tədqiqatının yüksək analitik həssaslığını təmin edən gücləndirici reaksiya inhibitorlarından təmizlənmiş yüksək təmizlənmiş NA preparatı əldə edilir.

TAMAMLAMA FORMALARI

Reagent dəsti 2 konfiqurasiyada mövcuddur:

Forma 1-ə “DNA-sorb-S-M” 50 versiyası reagentlər dəsti daxildir.

Forma 2-yə 100 versiyası “DNA-sorb-S-M” reagentlər dəsti daxildir.

Ehtiyat tədbirləri və tullanması haqqında məlumat

Heyvanlardan bioloji material öyrənilərkən, Rusiya Kənd Təsərrüfatı və Neft Nazirliyinin 27 yanvar 1997-ci il tarixli 13-7-2/840 nömrəli qaydalarına uyğun olaraq iş aparılmalıdır. diaqnostik laboratoriyalar polimeraza zəncirvari reaksiya metodundan istifadə etməklə. Əsas müddəalar”, Baytarlıq Departamenti tərəfindən təsdiq edilmişdir.

Qida məhsulları, bioloji əlavələr, heyvan yemi və ya bitki materialları tədqiq edilərkən iş tələblərə uyğun aparılmalıdır. metodik göstərişlər MU 1.3.2569-09 “Tərkibində patogenlik qrupları olan mikroorqanizmləri olan materialla işləyərkən nuklein turşusunun gücləndirilməsi üsullarından istifadə edən laboratoriyaların işinin təşkili” və GOST R 53214-2008 “Qida məhsulları. Genetik cəhətdən dəyişdirilmiş orqanizmlərin və onlardan alınan məhsulların aşkarlanması üçün analitik üsullar.

Ümumi tələblər və təriflər”.

İşləyərkən həmişə aşağıdakı tələblərə əməl etməlisiniz:

– Laboratoriya prosesi bir istiqamətli olmalıdır. Təhlildə aparılır ayrı otaqlar(zonalar). İş Ekstraksiya Zonasında başlamalı və Gücləndirmə və Aşkarlama Zonasında davam etməlidir. Nümunələri, avadanlıqları və ya reagentləri əvvəlki proses addımının yerinə yetirildiyi əraziyə qaytarmayın.

– İstifadə edilməmiş reagentlər, vaxtı keçmiş reagentlər, həmçinin Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 4/15 istifadə edilmiş reagentlər, qablaşdırma3, bioloji material, o cümlədən materiallar, alətlər və bioloji materialla çirklənmiş əşyalar , SanPiN 2.1.7.2790-10 "Tibbi tullantıların idarə edilməsinə dair sanitariya-epidemioloji tələblər" tələblərinə uyğun olaraq utilizasiya edilməlidir.

– Hər əməliyyatla avtomatik filtr pipetləri üçün birdəfəlik uclarından istifadə edin və dəyişdirin4. Birdəfəlik plastik qablar dezinfeksiya üçün istifadə edilə bilən dezinfeksiyaedici maddə olan xüsusi konteynerə atılmalıdır. tibbi tullantılar.

– Nümunə hazırlamaq üçün istifadə olunan qablar (havanın və zibil) və metal alətlər (skalpel, qayçı, cımbız, qarışdırıcı əlavələr və s.) dezinfeksiyaedici məhlulda (məsələn, dikloroizosiyanurik turşunun natrium duzunun 0,2% məhlulu) bir saat saxlanılır. , səthi aktiv yuyucu vasitələrlə kran suyu ilə yuyulur və axar və deionlaşdırılmış suda yuyulduqdan sonra 180 C temperaturda 4 saat quru sobada qurudulur.

– Reagent dəsti müəyyən edilmiş sayda nümunələrin öyrənilməsi üçün birdəfəlik istifadə üçün nəzərdə tutulub (“Tərkibi” bölməsinə baxın).

– Reagent dəsti bu təlimatlara uyğun olaraq istifadəyə hazırdır.

Reagent dəstini ciddi şəkildə təyinatı üzrə istifadə edin.

– Daxili qablaşdırma zədələnmişsə və ya reagent dəstindən istifadə etməyin görünüş Reagent təsvirə uyğun gəlmir.

– Təlimatlara uyğun daşınma və saxlama şərtlərinə əməl edilmədikdə reagent dəstindən istifadə etməyin.

İstifadə olunmamış reagentlər, saxlama müddəti ötmüş reagentlər, istifadə olunmuş reagentlər, qablaşdırmalar G tibbi tullantıların təhlükə sinfinə aiddir.

Vakuum aspiratoru istifadə edərək ekstraksiya prosesində supernatantı çıxarmaq üçün filtrsiz birdəfəlik ucluqlardan istifadə olunur.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 5/15

– İstifadə müddəti bitdikdən sonra reagent dəstindən istifadə etməyin.

– Nümunələr və reagentlərlə işləyərkən birdəfəlik tozsuz əlcəklər, laboratoriya paltoları və göz qoruyucu vasitələrdən istifadə edin. İşi bitirdikdən sonra əllərinizi yaxşıca yuyun. Bütün əməliyyatlar insan bədəni ilə təmasdan qaçmaq üçün yalnız əlcəklərlə aparılır.

– Buxarları inhalyasiya etməkdən, dəri, gözlər və selikli qişalarla təmasdan çəkinin, udmayın. Təmasda olduqda, təsirlənmiş ərazini dərhal su ilə yuyun və zəruri hallarda həkimə müraciət edin. tibbi yardım.

– Reagentin təhlükəsizlik məlumat vərəqləri (SDS – təhlükəsizlik məlumat vərəqi) tələb olunduğu təqdirdə mövcuddur.

Nəticə ola biləcək hadisələrin qiymətləndirilməsi mənfi nəticələr insan orqanizmi üçün:

Məqsədinə uyğun istifadə edildikdə və yuxarıda göstərilən ehtiyat tədbirləri yerinə yetirildikdə, insan orqanizmi ilə təması istisna edilir.

Fövqəladə hallarda aşağıdakılar mümkündür:

- həssas insanlarda gözlərin selikli qişasının qıcıqlanması;

- həssas insanlarda dərinin qıcıqlanması,

- allergik reaksiya,

- nəfəs aldıqda zərər;

- Ağızdan qəbul edildikdə zərərlidir.

Reagent dəstinin insan orqanizminə spesifik təsiri:

- Kanserogen təsiri yoxdur.

- Heç bir mutagen təsiri yoxdur.

- Reproduktiv toksiklik yoxdur.

ƏLAVƏ MATERİALLAR VƏ AVADANLIQ

(istehsalçılar/təchizatçılar göstərilməklə):

1. 1,5 və 5,0 ml birdəfəlik polipropilen vintli və ya sıx möhürlənmiş borular (məsələn, Axygen, Inc.

("Exigen, Inc"), ABŞ və ya oxşar).

2. 200-ə qədər və 1000 µl-ə qədər filtri olan dəyişkən həcmli pipetlər üçün birdəfəlik istifadə olunan uclar (məsələn, Axygen, Inc., ABŞ və ya oxşar).

3. 200 µl-ə qədər dəyişən həcmli pipetlər üçün birdəfəlik ucluqlar (məsələn, Axygen, Inc., ABŞ və ya oxşar).

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 6/15

4. 1,5 ml borular üçün raflar (məsələn, Axygen, Inc., ABŞ və ya oxşar).

5. Laminar başlıq, bioloji təhlükəsizlik sinfi II tip A (məsələn, “BAVp-01-“Laminar-S”-1,2”, “Laminar Systems” ASC, Rusiya və ya oxşar).

6. Eppendorf boruları üçün 25 ilə 100 °C arasında termostat (məsələn, SIA Biosan, Latviya və ya oxşar).

7. 25 ilə 100 °C arasında olan Eppendorf boruları üçün termostat çalkalayıcı (məsələn, TS-100, SIA Biosan, Latviya və ya oxşar).

8. Eppendorf boruları üçün mikrosentrifuqa maksimum sürətən azı 12 min q sentrifuqalama (məsələn, MiniSpin, Eppendorf (Eppendorf Manufacturing Corporation), Manufacturing Corporation Germany və ya oxşar).

9. Vortex (məsələn, SIA Biosan, Latviya və ya oxşar).

10. Süni mayenin çıxarılması üçün tutucu kolba ilə tibbi vakuum aspiratoru (məsələn, “OM-1”, “Utes” MMC, Rusiya və ya oxşar).

11. Avtomatik dəyişən həcmli dispenserlər (məsələn, Biohit MMC, Rusiya və ya oxşar).

12. Soyuducu 2 ilə 8 ° C arasında dondurucu mənfi 24 ilə mənfi 16 C arasında.

13. MU 1.3.2569-09-a uyğun olaraq ayrıca xalat, papaqlar, ayaqqabılar və birdəfəlik əlcəklər.

14. Materialların atılması və inaktivləşdirilməsi üçün birdəfəlik plastik qablar.

–  –  –

HEYVANLARDAN BİOLOJİ MATERİDDƏN DNT EKSTRASİYASI

2. Seçin tələb olunan miqdar Vidalı və ya sıx bağlanan qapaqlı 1,5 ml birdəfəlik polipropilen borular (PZR sınağı üçün nəzərdə tutulubsa, mənfi və müsbət ekstraksiya nəzarətləri daxil olmaqla).

Lizis reagentinin tamponunu və yuma məhlulunu 1 2 ilə 8 C arasında olan temperaturda saxlayarkən kristallar şəklində çöküntü əmələ gəlməsi mümkündür.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 8/15

3. Hər boruya 10 µl BKO6 əlavə edin (əgər bu PCR tədqiqatı üçün nəzərdə tutulubsa). Borulara 400 µl lizis reagent tamponu və 17 µl lizis reagenti əlavə edin.

4. Hər nümunə üçün süzgəcli ayrıca ucdan istifadə edərək, hazırlanmış borulara 100 µl sınaq nümunələri6 əlavə edin.

DİQQƏT! Lizis reagenti üçün 400 µl tampon və 17 µl lizis reagenti lazımi miqdarda test nümunəsi olan bir boruya əlavə edilə bilər və ora 10 µl BKO7 əlavə edilə bilər (əgər bu PCR tədqiqatı üçün nəzərdə tutulubsa) bir filtr.

5. Mənfi nəzarət (NK) ekstraksiya borusuna 100 μl NCO əlavə edin, müsbət nəzarət (PC) çıxarma borusuna 90 μl NKO və 10 μl PCO əlavə edin (əgər ekstraksiya nəzarətləri PCR tədqiqatları üçün nəzərdə tutulubsa).6

6. Qapaqları sıx bağlayın, hərtərəfli qarışdırın və damcıları burulğan edin.

Boruları 1 saat ərzində temperaturu 64 °C olan termostata qoyun, vaxtaşırı burulğanla qarışdırın (hər 10-12 dəqiqədə 5 dəfə). 60 ° C temperaturda 12 saat inkubasiyaya icazə verilir.

7. Həll edilməmiş nümunə hissəciklərini 10 min q-da 5 dəqiqə sentrifuqa edərək (məsələn, MiniSpin mikrosentrifuqası üçün 12 min rpm, Eppendorf Manufacturing Corporation) pellet edin.

8. Süzgəcləri olan ayrı uclardan istifadə edərək çox diqqətlə (aslı hissəciklərdən və yağ damcılarından qaçaraq) 200-350 µl həcmdə supernatant mayeni götürün və yeni borulara köçürün. Damcıları burulğanla çökdürün.

9. Universal sorbenti burulğandan istifadə edərək güclü şəkildə qarışdıraraq yenidən dayandırın. Ayrı ucu olan hər bir boruya 25 µl yenidən dayandırılmış universal sorbent əlavə edin və qapaqları möhkəm bağlayın.

Burulğanla qarışdırın, hər 2 dəqiqədən bir qarışdıraraq 10 dəqiqə rəfdə buraxın.

Test və nəzarət nümunələrinin həcmini dəyişdirmək mümkündür gücləndirmə üçün istifadə olunan reagentlər dəsti üçün təlimatlara baxın;

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 9/15

18. Aşağıdakı paraqraflarda göstərilən yuma prosedurunu təkrarlayın. 15-16, supernatantı tamamilə çıxarın.

19. Universal sorbenti qurutmaq üçün qapaqları açıq olan sınaq borularını 5-10 dəqiqə temperaturu 64 °C olan termostata qoyun.

20. Borulara 50-100 μl elüsyon buferi B əlavə edin (istifadə olunan gücləndirici reagent dəsti üçün təlimatlara baxın).

Sorbent tamamilə yenidən dayandırılana qədər burulğanla qarışdırın. 5-10 dəqiqə ərzində 64 °C-də bir termostata qoyun, dövri olaraq (dəqiqədə bir dəfə) burulğanla qarışdırın.

Təmizlənmiş DNT 2-8 °C temperaturda bir həftə, mənfi 24-dən mənfi 16 °C-ə qədər olan temperaturda 6 ay, mənfi 68 °C-dən çox olmayan temperaturda isə bir il saxlanıla bilər. Bunu etmək üçün, sorbent tutmadan, supernatant mayeni yeni bir sınaq borusuna köçürmək lazımdır.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 10/15

QİDALARDAN, BİOLOJİ ƏLAQƏLƏRDƏN DNT-NİN EKSTRASİYASI,

HEYVAN YEMİ VƏ YA BİTKİ XAMMALLARI

DİQQƏT! DNT çıxarılması üçün bioloji materialın hazırlanması proseduru və sınaq nümunəsinin həcmi üçün istifadə olunan gücləndirici reagent dəsti üçün təlimatlara baxın.

1. Lizis reagent tamponunu və 1-ci məhlulu yuyun, əgər onlar 2 ilə 8 °C arasında, kristallar tamamilə həll olunana qədər 64 °C temperaturda saxlanılıbsa.

2. Əvvəlcədən işlənmiş sınaq nümunələri olan 1,5 ml boruları rafa qoyun (nümunənin həcmi/miqdarı, istifadə olunan gücləndirici reagent dəsti üçün təlimatlara baxın).

3. Mənfi ekstraksiya nəzarəti (EC) üçün vintli və ya sıx qapaqlı 1,5 mL birdəfəlik polipropilen boru hazırlayın. Sınaq borusuna 100 µl OKO əlavə edin.

4. Sınaq nümunələri və TC ilə sınaq borularına lizis reagenti üçün 400 μl bufer və 17 μl lizis reagenti əlavə edin.

5. Qapaqları sıx bağlayın, hərtərəfli qarışdırın və damcıları burulğan edin.

Boruları 1 saat ərzində temperaturu 64 °C olan termostata qoyun, vaxtaşırı burulğanla qarışdırın (hər 10-12 dəqiqədən bir 5 dəfə) və ya çalkalayıcı termostatdan istifadə edin.

6. Həll edilməmiş nümunə hissəciklərini 10 min q-da 5 dəqiqə sentrifuqa edərək pellet edin (məsələn, MiniSpin mikrosentrifuqa üçün 12 min rpm, Eppendorf Manufacturing Corporation).

7. Vidalı və ya sıx qapaqlı yeni 1,5 ml-lik birdəfəlik polipropilen boruların tələb olunan sayını seçin.

8. Universal sorbenti burulğandan istifadə edərək güclü şəkildə qarışdıraraq yenidən dayandırın. Ayrı ucu olan hər bir boruya 25 µl yenidən dayandırılmış universal sorbent əlavə edin və qapaqları möhkəm bağlayın.

9. Lizis nümunələri olan borulardan 200-350 µl həcmdə supernatant mayeni çox ehtiyatla (asma hissəciklərin və yağ damcılarının daxil olmasına yol verməmək şərti ilə) süzgəcləri olan ayrı uclardan istifadə edərək götürün və sorbentli borulara köçürün. Burulğanla qarışdırın, hər 2 dəqiqədən bir qarışdıraraq 10 dəqiqə rəfdə buraxın.

Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 12/27/16 / səhifə 11/15

10. Boruları mikrosentrifuqada 1 dəqiqə 2 min q (məsələn, MiniSpin mikrosentrifuqa üçün 5 min rpm, Eppendorf Manufacturing Corporation) sentrifuqa edin.

11. Sorbenti tutmadan, vakuum aspiratorundan istifadə edərək, 200 µl filtrsiz ayrıca ucluq ilə hər borudan supernatant mayeni çıxarın.

12. Sınaq borularına 300 μl yuyucu məhlul 1 əlavə edin, qapaqları möhkəm bağlayın və universal sorbent tamamilə yenidən asılana qədər burulğan edin.

13. Boruları mikrosentrifuqada 1 dəqiqə 2 min q-da sentrifuqa edin.

14. Sorbent tutmadan, vakuum aspiratordan istifadə edərək, filtrsiz ayrıca 200 µl ucu ilə hər borudan supernatant mayeni çıxarın.

15. Sınaq borularına 500 μl yuyucu məhlul 2 əlavə edin, qapaqları möhkəm bağlayın və universal sorbent tamamilə yenidən dayandırılana qədər burulğan edin.

16. Boruları mikrosentrifuqada 1 dəqiqə 7 min q-da sentrifuqa edin (məsələn, MiniSpin mikrosentrifuqa üçün 10 min rpm, Eppendorf Manufacturing Corporation).

17. Sorbent tutmadan, vakuum aspiratordan istifadə edərək, filtrsiz ayrıca 200 µl ucu ilə hər borudan supernatant mayeni çıxarın.

18. Aşağıdakı paraqraflarda göstərilən yuma prosedurunu təkrarlayın. 15-16, supernatantı tamamilə çıxarın.

19. Universal sorbenti qurutmaq üçün qapaqları açıq olan sınaq borularını 5-10 dəqiqə temperaturu 64 °C olan termostata qoyun.

20. Sınaq borularına 50 µl elüsyon buferi B əlavə edin, sorbent tamamilə yenidən dayandırılana qədər burulğanla qarışdırın. 5-10 dəqiqə ərzində 64 °C-də bir termostata qoyun, dövri olaraq (dəqiqədə bir dəfə) burulğanla qarışdırın.

21. Boruları mikrosentrifuqada 1 dəqiqə 10 min q-da sentrifuqa edin. Supernatant təmizlənmiş DNT ehtiva edir. Nümunələr PCR üçün hazırdır.

Təmizlənmiş DNT bir həftə ərzində 2 ilə 8 °C arasında, mənfi 24 ilə mənfi 16 °C arasında 6 ay ərzində və Form 1 temperaturda saxlanıla bilər: REF K1-6-50-Mod / VER 12 /27/16 / səhifə 12/15 il ərzində mənfi 68 °C-dən yüksək olmayan. Bunu etmək üçün, sorbent tutmadan, supernatant mayeni yeni bir sınaq borusuna köçürmək lazımdır.

SAXLANMA MÜDDƏTİ, NƏQLİM VƏ SAXLAMA ŞƏRTLƏRİ.

Ən yaxşı tarixdən əvvəl. 12 ay İstifadə müddəti bitmiş reagent dəstləri istifadə edilə bilməz. Açılmış reagentlərin yararlılıq müddəti, təlimatlarda başqa hal nəzərdə tutulmayıbsa, açılmamış reagentlər üçün etiketlərdə göstərilən son istifadə tarixinə uyğundur.

Nəqliyyat. Reagent dəsti 2 ilə 8 C temperaturda 5 gündən çox olmamaq şərti ilə soyuq elementləri olan termal qablarda, bütün növ üzlüklərlə daşınmalıdır. nəqliyyat vasitələri. Qəbul edildikdən sonra müəyyən edilmiş saxlama temperaturlarına uyğun olaraq sökün.

Saxlama. Lizis reagenti istisna olmaqla, reagent dəstini 2 ilə 25 C temperaturda saxlayın. Lizis reagentini 2 ilə 8 C temperaturda soyuducuda saxlayın.

Soyuducu kameralar tənzimlənən temperatur şəraitini təmin etməlidir.

Lizis məhlulu 30 sm 3,

Yuma məhlulu 1 30 sm 3,

Təmizləmə məhlulu üçün konsentrat 2 20 sm 3,

Sorbent süspansiyonu 2 sm 3,

DNT elüsyon tamponu 4 sm 3.

Əməliyyat proseduru:

Dəstdən 20 sm 3 konsentrat, 80 sm 3 distillə edilmiş su və 100 sm 3 96% etanol ayrı şüşədə qarışdırmaqla təmizləyici məhlul 2 hazırlayın. Məhlulu burada saxlayın otaq temperaturu

sıx vidalanmış şüşədə.

Sorbentin vəziyyətini yoxlayın - çökən zaman süspansiyonun həcminin təxminən yarısını tutmalıdır.

Sıx qapalı 1,5 sm 3 polipropilen boruya (tercihen vida qapağı ilə) 100 µl əvvəlcədən hazırlanmış test nümunəsi, mənfi və ya müsbət nümunə əlavə edin, 300 µl lizis məhlulu əlavə edin (hər nümunəyə ayrıca ucluq ilə) və qarışdırın. 3-10 dəfə pipetləmə ilə hərtərəfli.

15-20 µl yenidən dayandırılmış sorbent əlavə edin, burulğanla yaxşıca qarışdırın, sorbentin tam çökməsi üçün ştativdə 5-7 dəqiqə qoyun.

300 µl yuyucu məhlul 1 əlavə edin, sorbent tamamilə yenidən dayandırılana qədər burulğanla qarışdırın (sorbent pis parçalanırsa, onu pipetlə parçalayın), 30 saniyə ərzində 4-8 min rpm-də sentrifuqada çöküntü. Ayrı bir ucdan istifadə edərək hər bir borudan supernatant toplayın.

800 μl yuyucu məhlul 2 əlavə edin, sorbent tamamilə yenidən dayandırılana qədər burulğan edin, mikrosentrifuqada 6-10 min rpm-də 30 saniyə ərzində çöküntüsü tökün və üstünü toplayın.

6-cı addımı təkrarlayın, supernatantı diqqətlə seçin, sorbent çöküntüsünü termostatda 65 °C-də 5 dəqiqə qurudun.

Sorbenti 30-40 μl elüsyon buferində yenidən dayandırın, 65°C-də 5 dəqiqə termostata qoyun, vaxtaşırı burulğanla silkələyin.

Mikrosentrifuqada çöküntü maksimum sürət 1 dəq.

Nümunə PCR üçün hazırdır, supernatant təmizlənmiş DNT ehtiva edir.

DNT hasilatı mərhələsində mənfi nəzarət kimi, şoran və ya deionlaşdırılmış sudan istifadə etmək lazımdır.

DNT-sorb-PZR dəsti ilə DNT ekstraksiyasının effektivliyi 30-60% təşkil edir.

Klinik material	Plazma, serum	Qırıntı, sperma, faringeal yuyulma, sidik	Biopsiya, qan, nəcis
Pipetlərin sayı
Sorbent həcmi
Sorbent çökmə dərəcəsi	8 min rpm	6 min rpm	3-4 min rpm
Eluent həcmi
DNT ekstraksiyasının effektivliyi

5.2. Mərhələ 2. PCR gücləndirilməsi üçün dəstin PCR tərkibinin qurulması:

5x reaksiya tamponu 1000 µl (özlü, şəffaf mavi məhlul)

Deionlaşdırılmış su.2000 µl

Nukleotidlərin qarışığı.500 µl

Taq polimeraza.100 µl

Astar qarışığı.500 µl

PCR üçün mum.2000 µl

Müsbət nəzarət: 100 µl

Mənfi nəzarət 100 µl

Mineral yağ 4000 µl

Dəst bir il ərzində mənfi 20°C temperaturda saxlanılır.